测量精子是否好动

　　3.高速系统 已有两种高频画面系统问世，一是 MHS-200系统（日本东京 NAC 联合公司制造），联合应用高敏感性和高分辨率照相机，其操作图像频率高达每秒 200 次。另一系统为 CTS-200，图像频率亦可高达每秒 200Hz（美国加州 SantaRosa运动分析公司制造）

　　4.校正和样本识别 为了校正和识别样本，需用时 /日显示器和文本显示器。这些仪器能在记录之前把文本和数字特征转换成摄像机的输出讯号。作为研究目的，宜使用 For-A，VTG-33时 /日显示器（日本东京 For-A 公司），而作为常规应用，则更为廉价的松下实业公司的产品能完全满足要求。我们已经应用一种文本显示器（美国加州 Santa Barbara Vistek生产的 VTI-800型），该型号的装置允许使用自由文本，而不仅是提供时间 /日期信息。

　　5.光学显微镜（microscope optics） 为了便于手工轨迹再造，可应用正低（PL）和负高（NH）相差显微镜和 Nomarski光学显微镜。PL 相差光学显微镜最为常用，对于视觉分析已完全足够。但有些学者发现 NH 相差显微镜可提供更好图像以进行图像数码分析，而且应该用来作各种记录以供分析（采用机械视频方法）。Nomarski显微镜可提供一个准三维图像（quasi-three-dimentionalimage），在分析鞭毛运动时特别有用。其缺点是需要用更强的光源和（或）更敏感的录像照相机。

　　当制作录像记录时，如同照片或电影显微摄像那样，建议始终尽可能地使用最低倍的物镜，因为这样可拍出亮度更高、焦距更深的图像。倘若分辨率转换不成问题，通常最好使用较低倍的物镜，并结合直接放大（利用照相机目镜）。虽然这并未去除亮度不足的问题，却能提供一个较大的图像，而又不失焦距的深度。

　　（四）运动特征

　　通过录像记录分析精子活动力和运动特征，从最初的 Katz和 Overstreet"牛眼法（bulls-eye）"开始已经走过了一段很长的路程。对于活动的精子，现可通过画面追踪来重现其在一定时间内的运动。分析手工重建轨迹的方法，与对显微电影摄影图像进行分析的手工或半自动化方法基本相同。计算机化精子活动力分析系统（见第五节）可自动再现精子活动轨迹并可获得其运动特征。

　　曲线轨迹长度可用一个曲线表或地图尺进行手工测量。从轨迹的两端开始，所得的两个值进行平均，曲线表也能用来测量肉眼可见的整个轨迹中线或平均轨迹的长度。直线轨迹长度可用直尺测量轨迹的起点和终点之间的距离计算出来。ALH 的测量既可用平行尺（通常沿着再造轨迹取三点即可），也可通过以下方法获得：即精子头部偏离平均轨迹的顶端一侧连至与该顶点相邻的偏向平均线的距离。这一测定可以在重建轨迹后在每个波上重复进行。然后将测得值平均即获得 ALH 之均值或取其最高测量值作为 ALH 最大值。如果ALH 值是通过测量精子头部侧向运动顶点与平均轨迹之间的距离获得的，那么其平均值或最大值乘以 2就代表整个轨迹的宽度。根据曲线轨迹与单位时间穿过平均轨迹的次数即可计算 BCF。至于平均轨迹则可用多种方法获得包括几何连接法（geometric connection）和五点平均拟合法（5-pointrunning average smoothing）。

　　五、运动特征的方法依赖性

　　（一）平均径线速率（VAP）

　　由于游动精子的轨迹并非绝对直线，也非完全对称，以至其平均径线可用数种方法得到。在定时曝光显微摄影术图像中，轨迹中线可用肉眼识别，所以可以作为手工分析的质心重建轨迹（centroid-reconstructed tracts），自动化及半自动化系统需要应用数学推导方法求得。五点平均拟合法已成为使用最广泛的方法，尽管此法并非总是适合每一条轨迹。

　　由于 BCF和 ALH 的差异，曲线速度对所有精子并非一致，即使具有相同 VSL 或 VAP 的精子亦是如此。但正是 VCL（结合屏幕图像频率）决定了轨迹点的间距和位置。尽管已发现五点平均拟合法在图像频率为 30 Hz时是分析人类精液精子中的最佳选择，但这种方法在图像频率更高时，对于轨迹分析及对于经洗涤或过度激活的精子并非最适宜。因为这些精子的 VCL值比精液精子高得多。故有些研究者的兴趣在于应用一种能获得人类精子前向运动平均轨迹的方法，而这种方法又是基于既非依赖于 VCL又非依赖于图像频率的几何学原理。

　　（二）精子头部侧向摆动幅度

　　在定时曝光显微摄影术图像中，轨迹宽度及平均 ALH 是通过测量胶卷投影图像或照片上轨迹带的外缘或外周而获得的。显然质心分析所得 ALH 值要小一些。因为测量时是以精子头部的中心（而不是其外缘）作为参照点。两者差别为 3～ 4μm，并没有什么实际意义，但对分析精子运动的各种方法缺乏实际经验者可能会产生混淆。

　　当测量手工重建轨迹以确定 ALH 值时，通常的方法是应用平行尺，仅在轨迹上取数点（通常是三点）。该方法没有把所有的精子头部侧向摆动考虑进去，因此许多幅度较小的摆动就被忽略了。然而，质心重建轨迹的半自动和自动化分析将测量每一个侧向波并用所得值来计算该轨迹的平均 ALH 值。因此手工分析所得 ALH 平均值稍大些。另一个问题是在取样频率相对较低的情况下，如为 30Hz时，侧向摆动的真正顶点可能会丢失。其原因是人为地测量了较小的侧向摆动波幅而导致 ALH 平均值偏低。这些误差的存在导致将轨迹的ALH 最大值定义为由平均或拟合轨迹测得的侧向摆动幅度最大值的 2倍（或是以几何方法测得的最大宽度）。迄今，尚无证据表明这对于任何特定精子运动更具代表性，或者表明是关于精子功能的一个更有用的预测指标。